兔真皮微血管內皮細胞

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更新時間：2025-04-09

兔真皮微血管內皮細胞

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細胞簡介：

兔真皮微血管內皮分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網狀層。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。微血管內皮細胞（MEC）在炎癥反應、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內皮細胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術的困難而使相關的研究受限。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

實驗室分離的兔真皮微血管內皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔真皮微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔真皮微血管內皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。

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